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通蔚生物為您詳細(xì)解羊elisa檢測(cè)試劑盒液體類(lèi)標(biāo)本
更新時(shí)間:2023-08-11   點(diǎn)擊次數(shù):1339次

實(shí)際應(yīng)用中,通過(guò)不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。


羊elisa檢測(cè)試劑盒操作步驟:

1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差;

2、根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi);

3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí);

4、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次;

5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘;

6、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次;

7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照;

8、取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果;

9、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。


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羊elisa檢測(cè)試劑盒液體類(lèi)標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3、尿液:用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并  放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。


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